Главная \ Новости и обзор литературы

Пропионовокислые бактерии как пробиотики

« Назад

10.03.2022 12:26

Пропионовокислые бактерии как пробиотики

Propionibacterium freudenreichii

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

L. I. Vorob’eva, Evgeniy YU. Khodjaev, Nina Vorobjeva
Propionic acid bacteria as probiotics
Microbial Ecology in Health and Disease. 2008; 20: 109-112

Пропионовокислые бактерии (ПКБ) обладают комплексом физиолого-биохимических свойств, что позволяет включать их в состав пробиотических композиций. Их потенциальные ресурсы пока недооценены. Список описанных пробиотических характеристик ПКБ необходимо расширить за счет добавления антимутагенной, реактивирующей и защитной (протекторной) активности, впервые обнаруженной нашей группой. Живые и мертвые клетки ПКБ и Luteococcus casei (лютеококк из семейства Propionibacteriaceae), а также их культуральная жидкость (КЖ) проявляли антимутагенное (АМ) действие на спонтанный и индуцированный мутагенез. Защитная и реактивная активность клеток Propionibacterium freudenreichii связана с внутриклеточным белком, идентифицированным как цистеинсинтаза, синтез которого индуцируется некоторыми стрессорными факторами. В неблагоприятных условиях, приводящих к лизису большинства клеток, выделившийся белок может играть жизненно важную роль в клеточной популяции в целом, поддерживая существование вида. Активный белок проявляет перекрестно-реактивные свойства, как защитное, так и реактивирующее действие на клетки кишечной палочки и дрожжей Saccharomyces cerevisiae и Candida guilliermondii. Филогенетически близкий к ПКБ Luteococcus casei продуцирует и выделяет в среду белковый метаболит, обладающий защитным и реактивирующим действием на клетки продуцента, Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae и Candida scottii, обработанные нагреванием и УФ-облучением. Экзометаболит синтезируется клетками в логарифмической фазе роста. Эффективность его воздействия обратно пропорциональна выживаемости микробов. КЖ Luteococcus casei рассматривается как источник нового пребиотика с реактивирующими и защитными свойствами

Фон

Совокупность всех микробных биоценозов человека и животных рассматривается как своеобразный экстракорпоральный орган. Общее количество его клеток превышает количество всех эукариотических клеток из тканей и органов (1). Концентрация бактериальных клеток в желудке, двенадцатиперстной и тонкой кишке может достигать 105 клеток/г. Ощелачивание приводит к увеличению бактериальной численности, которая достигает 1010-1011 клеток/г (2). Разнообразие бактерий включает более 500 видов. Общая масса бактерий в толстой кишке взрослого человека достигает 1,5-2,0 кг.

Роль кишечных микроорганизмов заключается в биосинтезе витаминов групп В и К, аминокислот и белков; метаболизме желчных пигментов и желчных кислот; адсорбции питательных веществ и микроэлементов; обеззараживании патогенов; регуляции перистальтики кишечника; защите от ксенобиотиков и образовании летучих кислот путем разложения продуктов.

Облигатные микроорганизмы кишечника не изолированы, а постоянно взаимодействуют с окружающей средой, центральной нервной, эндокринной и иммунной системами. Многочисленные дисбалансы приводят к тяжелым заболеваниям. В частности, применение антибиотиков угнетает фекальную микрофлору. При этом факультативные микробы могут колонизировать кишечник. Часто желудочно-кишечные инфекции связаны с колонизацией Helicobacter pylori. Считается, что эти бактерии провоцируют гастрит и дуоденит и играют определенную роль в развитии рака.

Устойчивые изменения соотношения нормальной микрофлоры пищеварительного тракта приводят к дисбактериозу. Комплексное ее лечение включает восстановление количества и/или баланса микробов нормальной микрофлоры путем применения пробиотиков. Пробиотики представляют собой монокультуры или смешанные культуры живых микроорганизмов, положительно влияющие на здоровье человека и животных за счет улучшения свойств эндогенной микрофлоры (3).

Некоторые лактобациллы, бифидобактерии и нелактобактерии, такие как Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Propionibacterium freudenreichii и дрожжи, такие как Saccharomyces cerevisiae, считаются пробиотиками для человека (4). В целом 96-99% резидентной микрофлоры кишечника человека являются строгими анаэробами, растущими при низких окислительно-восстановительных потенциалах среды. Таким образом, предполагается, что использование электролизованной воды, католита со значительными восстановительными свойствами, может способствовать жизнедеятельности нормальной микрофлоры (5).

Пропионовокислые бактерии (ПКБ) объединены в семейство Propionibacteriaceae, род Propionibacterium. Их отличительными особенностями являются: образование пропионовой кислоты в результате пропионовокислого брожения, зависимого от кофермента В12, и высокое содержание G+C (65-67%).

В зависимости от особенностей среды обитания ПКБ делятся на две группы: молочные, или классические, и кожные. Первые выделяют из молока, кисломолочных продуктов и сыра; они также содержатся в 24 видах овощей и фруктов. Кожные ПКБ представляют собой единственную анаэробную микрофлору здоровой кожи человека и компонент ассоциантов рубца жвачных животных (Ассоциация микробов - это сосуществование двух и более видов микроорганизмов в естественных (природных) и искусственно создаваемых условиях независимо от линии генетических связей и обладающих различными биологическими свойствами. В таком состоянии они могут находиться постоянно (аутофлора) или временно (паразитоценоз) в организме человека и животных - ред.). Молочные ПКБ использовались в сыроварении с древних времен. В России они входят в состав заквасок некоторых молочных продуктов, таких как «ПАМ» (ацидофильное молоко, обогащенное коммерческим препаратом пропионовокислых бактерий P. freudenreichii subsp. Shermaniiред.) и «Тонус», и являются источником витамина В12, порфиринов, антиоксидантных ферментов (СОД и каталазы) и пропионовой кислоты (6), но их потенциал в качестве пробиотиков, как правило, недооценивается (новые продукты: «Целебный», «Пропионикс кефирный» - ред.).

Некоторые бактерии были выделены из сыра на ранней стадии созревания. Они проводят ферментацию, типичную для рода Propionibacterium, и имеют высокое сходство по содержанию G+C (63,4%). Они были отнесены к роду Luteococcus на основании анализа линейного полиморфизма рестриктированных фрагментов ДНК и MALDI-TOF-масс-спектрального анализа белков цитоплазмы (прим. ред.: масс-спектрометр, наиболее широко используемый с MALDI - масс-спектрометр времени полета (TOF)). Штамм был идентифицирован как Luteococcus japonicus subsp. casei (Luteococcus japonicus - грамположительная и неподвижная бактерия из рода Luteococcus, выделенная из почвы в Японии - ред.) Они синтезируют экзометаболиты, обладающие как защитными, так и реактивными свойствами, и представляют несомненный интерес в связи с проблемами, обсуждаемыми в настоящей статье.

Пробиотические свойства ПКБ

Пробиотические свойства ПКБ связаны с: I) образованием полезных метаболитов и антимикробных соединений; II) синтезом β-галактозидазы, фермента, расщепляющего лактозу, что предотвращает непереносимость лактозы у некоторых людей; III) бифидогенной активностью; IV) массовым синтезом трегалозы, низкокалорийного углевода; V) содержанием некоторых микроэлементов (Mn-267, Fe-535, Cu-102; в мг/кг) в биомассе ПКБ, (7) которое превышает их концентрацию в молочноксилых и бифидобактериях; VI) снижением активности канцерогенных ферментов, β-глюкоронидазы, нитроредуктазы и азоредуктазы, которые превращают фекальные прокарциногены в активные формы канцерогенов (8) (данные были получены на животных, но ПКБ может вызывать аналогичные эффекты у людей); VII) образованием и накоплением во время восстановления нитратов и нитритов (9) (монооксид азота (NO) контролирует многие важные функции, такие как нейротрансмиссия, расширение сосудов, перистальтика кишечника и защита слизистой оболочки; хронические кишечные заболевания иногда вызываются отсутствием образования NO в организме); VIII) синтезом соединений с полезными физиологическими и противораковыми свойствами посредством изомеризации линолевой кислоты в P. freudenreichii ssp. shermanii; IX) апоптозом клеток колоректальной карциномы in vitro тем же штаммом (10).

Антимикробные продукты

Конечными продуктами энергетического обмена в ПКБ являются пропионовая и уксусная кислоты и СО2. Кислоты не поддерживают рост гнилостных бактерий, клостридий, дрожжей и грибков. СО2 участвует в снижении окислительно-восстановительного потенциала и токсичен для ряда аэробных гнилостных бактерий. Некоторые штаммы ПКБ продуцируют бактериоцины, которые ингибируют рост и выживание клеток Listeria monocytogenes и Yersinia enterocolitica, а также, в отличие от молочнокислых бактерий, рост грамотрицательных бактерий, дрожжей и плесени (11,12).

Антимутагенная активность

В настоящее время естественные защитные механизмы не всегда справляются с резким повышением мутационного давления, поэтому поиск и наличие антимутагенов следует рассматривать как элемент компенсаторного подхода к защите генофонда. Таким образом, большое значение в улучшении здоровья человека имеет возможность снижения количества мутагенов с использованием в качестве антимутагенного (АМ) фактора бактерий, преимущественно обитающих в кишечном тракте. Впервые продемонстрирована АМ-активность ПКБ в отношении мутаций, индуцированных 4-нитрохинолином и N-нитро-N-нитрозогуанидином (переходные мутации), а также 9-аминоакридином и 2-нитрофлуореном (мутации со сдвигом рамки считывания) (13). Живые и мертвые клетки, а также культуральная жидкость (КЖ) обладают АМ-эффектом. Показано, что АМ-активность КЖ обусловлена белковым соединением. AM-свойства ПКБ невозможно переоценить, принимая во внимание наличие в пище различного количества мутагенов.

Стимуляция роста бифидобактерий

ПКБ генерируют и выделяют бифидогенные метаболиты, способствуя росту некоторых штаммов бифидобактерий (11). 2-Амино-3-карбокси-1,4-нафтохинон, синтезируемый P. freudenreichii, является активным бифидогенным стимулятором.

Источники нутрицевтиков

Нутрицевтики обладают как питательными, так и лечебными свойствами. Уникальный метаболизм ПКБ обеспечивает их клетки набором кофакторов, в основном участвующих в переносе и перегруппировке С-1-соединений. Примечательно, что ключевая реакция пропионового брожения (превращение метилмалонил-КоА в пропионил-КоА) присутствует в клетках человека, но имеет противоположную направленность, приводя к образованию сукцината, необходимого для синтеза цитохромов, каталазы и других соединений порфиринового происхождения. ПКБ производит другие нутрицевтики, такие как витамины B9 и B12 и производные нуклеотидов. ПКБ являются рекордсменами по биосинтезу витамина В12. Его получают в результате промышленного культивирования этих бактерий. Витамин В12 принимает участие в кроветворении и применяется в терапии пернициозной анемии. Некоторые штаммы также продуцируют фолиевую кислоту (витамин B9). Фолиевая кислота является кофактором многочисленных метаболических реакций, включая биосинтез нуклеотидов, структурных блоков РНК и ДНК. Низкое содержание фолиевой кислоты коррелирует с повышенным содержанием гомоцистеина в крови и, следовательно, с сердечными заболеваниями (14). Сообщалось о некоторых доказательствах роли фолиевой кислоты в предотвращении определенных опухолей. ПКБ можно использовать в качестве клеточных фабрик при производстве фолиевой кислоты.

Производные нуклеотидов применяются в терапии для профилактики и лечения тромболитических заболеваний.

Накопление трегалозы

При различных стрессах клетки ПКБ вырабатывают значительное количество трегалозы, низкокалорийного пищевого сахара. Трегалоза служит стабилизатором белка, сохраняет естественный цвет и вкус пищи, ее свежесть.

Адгезивные свойства и способность выживать в кишечном тракте

Эффективные пробиотические бактерии должны обладать высокой адгезией и способностью сохранять жизнеспособность, несмотря на множество неблагоприятных факторов, таких как желудочные кислоты и ферменты, соли желчных кислот и ферменты тонкого кишечника, а также антагонистическое влияние других бактерий. В модельных опытах in vitro было показано, что уровень адгезии ПКБ составляет до 0,2-0,6% всех добавленных бактерий (15). Уровень адгезии лактобактерий и бифидобактерий был достоверно выше: от 1,3 до 24,3%. Установлено, что адгезия ПКБ может быть усилена их предварительной коагрегацией с другими пробиотическими бактериями. Устойчивость ПКБ к кислотности и солям желчных кислот повышалась предварительной адаптацией к вышеперечисленным стрессовым факторам (16).

ПКБ составляют незначительную часть от общей микрофлоры кишечника здорового человека (0,001%); однако ежедневное пероральное введение в течение недели приводило к достоверному увеличению их содержания (до 106 клеток/г). Этого количества вполне достаточно для проявления благоприятного воздействия на экологию кишечника и физиологию хозяина.

Эффект ПКБ как стимулятора роста других полезных бактерий достигается без колонизации и адгезии в кишечном тракте.

Защитная и реактивная активность - новые критерии использования ПКБ в качестве пробиотиков

В естественных условиях в организме человека и животных, при переработке пищевых продуктов и введении лекарственных средств бактерии периодически подвергаются воздействию различных стрессовых факторов. Сублетальные и летальные дозы стрессоров не всегда блокируют клеточное деление. Способность бактерий к выживанию в стрессовых ситуациях зависит от функционирования индуцируемых механизмов адаптации, включающих аутоиндукторы, компоненты белковой и небелковой природы (17).

Защитные экзометаболиты обнаружены у клеток Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomonas fluorescens и Lb. casei. Они могут напрямую взаимодействовать с клеточными структурами, нейтрализовать активные молекулы (18) или действовать как сигнальные молекулы, вызывая активацию реакции на стресс (17).

Белок с молекулярной массой 35 кДа был выделен из клеток P. freudenreichii (19). Оказывал как защитное, так и реактивирующее действие на клетки-продуценты и клетки кишечной палочки, подвергнутые УФ-облучению, нагреванию и воздействию желчных кислот. Путем секвенирования N-концевой и внутренней областей белка он был идентифицирован как цистеинсинтаза. Белок вырабатывается конститутивно, и его синтез усиливается нагреванием, УФ-светом и обработкой детергентом. Активный белок не выделяется в окружающую среду и проявляет защитные свойства в стрессовых ситуациях. При высокой смертности клеток, подвергаясь лизису, они выделяют свое содержимое. В то же время часть популяции, потенциально способная к репликации, но пораженная шоком, получает сигнал, активирующий в клетках естественные системы репарации. Иными словами, обнаруженный нами внутриклеточный реактивирующий белок может играть жизненно важную роль в клеточной популяции в целом, поддерживая существование вида в неблагоприятных условиях.

Белковый экзометаболит с реактивирующим и защитным (протекторным) действием выделяли фильтрованием культуральной жидкости из Luteococcus casei через смешанные ацетатные мембраны. Его биологическая активность связана с компонентом (м.м. около 8 кДа), полученным с помощью ВЭЖХ-гель-фильтрации (эксклюзионной хроматографии). Масс-спектральный анализ показал, что этот пептид имеет м.м. 7,6 кДа и составляет до 80% общего белка фракции, элюируемой с мембранного фильтра. Экзометаболит образуется во время логарифмической фазы роста Luteococcus casei и накапливается в среде в незначительных количествах. Наоборот, его количество достаточно для увеличения выживаемости бактерий в стрессированных клетках в 4-6 раз по сравнению с контрольными клетками. Для оценки защитного или реактивирующего действия клетки инкубировали в течение 10 мин до или после воздействия стрессового фактора перед их посевом на плотную среду. Контрольные клетки инкубировали в 3% растворе NaCl (элюент). Реактивный эффект экзометаболитов обратно зависел от выживаемости бактерий. Активный метаболит не обладает как митогенным, так и бактерицидным действием на продуцента и различные штаммы ПКБ. Белковый экзометаболит Luteococcus casei обладает уникальной широтой микробного спектра антистрессового действия. Была продемонстрирована перекрестная реакция активного фактора на стрессовые клетки E. coli и примитивных эукариот, дрожжей S. cerevisiae и Candida scottii (20,21). Широкая широта антистрессового действия и простота выделения экзометаболита из культуральной жидкости позволяют рассматривать его как новый перспективный пребиотик.

Вывод

Изучение пропионовокислых бактерий (ПКБ), их взаимосвязи с иммунными функциями и метаболизмом человеческого организма должно быть продолжено ввиду очевидных положительных эффектов этих бактерий. Увеличение содержания ПКБ в желудочно-кишечном тракте человека служит важной задачей. Это требует создания селективных штаммов бактерий, способных оседать и конкурировать с компонентами микрофлоры кишечника и быть совместимыми с другими пробиотиками.

Дополнительная информация:

Литература

  1. Shenderov BA. Medical microbial ecology and functional nutrition. Moscow: Grant, 2001 (in Russian).
  2. Saarela M, Lahteenmaki L, Crittenden R, Salminen S, Mattila-Sandholm T. Gut bacteria and health foods - the European perspective. Int J Food Microbiol. 2002;78:99-117.
  3. Fuller R. Probiotics in man and animals. J Appl Bacteriol. 1989;66:365-78.
  4. Holzapfel W, Haberer J, Snell U, Schillinger JHJ, Huis in’t Veld JH. Overview of gut flora and probiotics. Int J Food Microbiol. 1998;41:85-101.
  5. Vorobjeva NV. Selective stimulation of the growth of anaerobic microflora in the human intestinal tract by electrolyzed reducing water. Med Hypotheses. 2005;64:543-6.
  6. Vorobjeva LI. Propionibacteria. Dordrecht: Kluwer Academic; 1999.
  7. Mantere-Alhonen S. Propionibacteria used as probiotics. A review. Lait. 1995;75:447-52.
  8. Perez-Chaia A, Zarate G, Oliver G. The probiotic properties of propionibacteria. Lait. 1999;79:175-86.
  9. Roland N, Avice JC, Ourry A, Maubois JL. Production of nitric oxide by propionibacteria: a new criterion for their utilization as probiotics. Second International Symposium on Propionibacteria, University College, Cork, Ireland, 1998:40.
  10. Jan G, Belzacq S, Haouzi D, Rouault A, Metivier D, Kroemer G, et al. Propionibacteria induce apoptosis of colorectal carcinoma cells via short-chain fatty acids acting on mito- chondria. Cell Death Differ. 2002;9:179-88.
  11. Warminska-Radiko I, Laniewske-Moroz L, Babuchowski A. Influence of propionibacteria on selected pathogenic microorganisms. 3rd International Symposium on Propionibac-  teria, Zurich, 8-11 July 2001:36.
  12. Holo H, Faye T, Brede DA, Nilsen T, Oregard I, Langsrud T, et al. Bacteriocins of propionic acid bacteria. Lait. 2002;82: 59-68.
  13. Vorobjeva LI. Antimutagenic properties of bacteria: review. Appl Biochem Microbiol. 2002;38:97-107.
  14. Hugenholtz J, Hunik J, Santos H, Smid E. Nutraceutical production by propionibacteria. Lait. 2002;82:103-13.
  15. Jan G, Leverrier P, Proudi I, Roland N. Survival and beneficial effects of propionibacteria in the human gut: in vivo and in vitro investigations. Lait. 2002;82:131-44.
  16. Leverrier P, Dimova D, Pichereau V, Auffrey Y, Boyaval P, Jan G. Susceptibility and adaptive response to bile salts in Propionibacterium freudenreichii: physiological and proteomic analysis. Appl Environ Microbiol. 2003;69:3809-18.
  17. Rowbury RJ. UV radiation-induced enterobacterial responses, other processes that influence UV tolerance and likely environmental significance. Sci Prog. 2003;86:1-23.
  18. Vorobjeva LI. Physiological peculiarities of propionibacteria - present facts and prospective applications. Sci Prog. 2000;83: 277-301.
  19. Vorobjeva LI, Leverrier P, Zinchenko AA, Boyaval P, Khodjaev E, Jan G. Anti-stress activity of Propionibacterium freudenreichii: identification of a reactivative protein. Antonie van Leeuwehoek. 2004;85:53-65.
  20. Vorobjeva LI, Khodjaev EY, Ponomareva GM. The extra-cellular protein of Luteococcus japonicus subsp. casei reactivates cells inactivated by UV irradiation or heat shock. Microbiology 2003;72:482-7 (in Russian).
  21. Vorobjeva LI, Khodjaev EY, Ponomareva GM.  Cross-effects of extracellular factors of adaptation to stress in Luteococcus casei and Saccharomyces cerevisiae. Appl Biochem Microbiol 2005;41:171-5 (in Russian).

Будьте здоровы!

 

ССЫЛКИ К РАЗДЕЛУ О ПРЕПАРАТАХ ПРОБИОТИКАХ

  1. ПРОБИОТИКИ
  2. ПРОБИОТИКИ И ПРЕБИОТИКИ
  3. СИНБИОТИКИ
  4. ДОМАШНИЕ ЗАКВАСКИ
  5. КОНЦЕНТРАТ БИФИДОБАКТЕРИЙ ЖИДКИЙ
  6. ПРОПИОНИКС
  7. ЙОДПРОПИОНИКС
  8. СЕЛЕНПРОПИОНИКС
  9. БИФИКАРДИО
  10. ПРОБИОТИКИ С ПНЖК
  11. МИКРОЭЛЕМЕНТНЫЙ СОСТАВ
  12. БИФИДОБАКТЕРИИ
  13. ПРОПИОНОВОКИСЛЫЕ БАКТЕРИИ
  14. МИКРОБИОМ ЧЕЛОВЕКА
  15. МИКРОФЛОРА ЖКТ
  16. ДИСБИОЗ КИШЕЧНИКА
  17. МИКРОБИОМ и ВЗК
  18. МИКРОБИОМ И РАК
  19. МИКРОБИОМ, СЕРДЦЕ И СОСУДЫ
  20. МИКРОБИОМ И ПЕЧЕНЬ
  21. МИКРОБИОМ И ПОЧКИ
  22. МИКРОБИОМ И ЛЕГКИЕ
  23. МИКРОБИОМ И ПОДЖЕЛУДОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА
  24. МИКРОБИОМ И ЩИТОВИДНАЯ ЖЕЛЕЗА
  25. МИКРОБИОМ И КОЖНЫЕ БОЛЕЗНИ
  26. МИКРОБИОМ И КОСТИ
  27. МИКРОБИОМ И ОЖИРЕНИЕ
  28. МИКРОБИОМ И САХАРНЫЙ ДИАБЕТ
  29. МИКРОБИОМ И ФУНКЦИИ МОЗГА
  30. АНТИОКСИДАНТНЫЕ СВОЙСТВА
  31. АНТИОКСИДАНТНЫЕ ФЕРМЕНТЫ
  32. АНТИМУТАГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ
  33. МИКРОБИОМ и ИММУНИТЕТ
  34. МИКРОБИОМ И АУТОИММУННЫЕ БОЛЕЗНИ
  35. ПРОБИОТИКИ и ГРУДНЫЕ ДЕТИ
  36. ПРОБИОТИКИ, БЕРЕМЕННОСТЬ, РОДЫ
  37. ВИТАМИННЫЙ СИНТЕЗ
  38. АМИНОКИСЛОТНЫЙ СИНТЕЗ
  39. АНТИМИКРОБНЫЕ СВОЙСТВА
  40. КОРОТКОЦЕПОЧЕЧНЫЕ ЖИРНЫЕ КИСЛОТЫ
  41. СИНТЕЗ БАКТЕРИОЦИНОВ
  42. АЛИМЕНТАРНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ
  43. МИКРОБИОМ И ПРЕЦИЗИОННОЕ ПИТАНИЕ
  44. ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ПИТАНИЕ
  45. ПРОБИОТИКИ ДЛЯ СПОРТСМЕНОВ
  46. ПРОИЗВОДСТВО ПРОБИОТИКОВ
  47. ЗАКВАСКИ ДЛЯ ПИЩЕВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ
  48. НОВОСТИ

Комментарии


Комментариев пока нет

Пожалуйста, авторизуйтесь, чтобы оставить комментарий.
Также Вы можете войти через:
При входе и регистрации вы принимаете пользовательское соглашение
Пожалуйста, авторизуйтесь, чтобы оставить комментарий.

Авторизация
Введите Ваш логин или e-mail:

Пароль :
запомнить

Этот сайт использует файлы cookie и метаданные. Продолжая просматривать его, вы соглашаетесь на использование нами файлов cookie и метаданных в соответствии с Политикой конфиденциальности.
Продолжить