ООО "ПРОПИОНИКС"
пн-пт с 09:00 до 18:00 | +7 (966) 348-80-35 |
Клинический ответ и изменения уровня цитокинов и зонулина у пациентов с диареей-преобладающим синдромом раздраженного кишечника, получавших бифидобактерии Longum ES1 в течение 8 или 12 недель
Резюме. Bifidobacterium longum (B. longum) ES1 - пробиотический штамм, способный модулировать состав микробиома, противовоспалительную активность и барьерную функцию кишечника. Мы исследовали применение B. Longum ES1 в лечении пациентов с диареей-преобладающим синдромом раздраженного кишечника (СРК-Д). Шестнадцать пациентов получали лечение в течение 8 или 12 недель B. Longum ES1 (1 × 109 КОЕ/сут). Сывороточный зонулин и цитокины измеряли в исходном состоянии (Т0) и в конце терапии (Т1). Клинический ответ на терапию оценивался с помощью балльной системы оценки тяжести СРК. Уровень интерлейкинов IL-6, IL-8, IL-12p70 и фактора некроза опухоли TNF-α снижался от Т0 до Т1 независимо от продолжительности лечения (Р < 0,05), в то время как уровень зонулина снижался только у пациентов, получавших лечение в течение 12 недель (Р = 0,036). Клинический ответ наблюдался у 5/16 пациентов (31%): у 4/8 (50%) при лечении в течение 12 недель и у 1/8 (13%) - в течение 8 недель. Боль в животе улучшилась только у пациентов, получавших лечение в течение 12 недель (5/8 против 0/8, Р = 0,025), в то время как консистенция стула улучшилась независимо от продолжительности терапии (Р < 0,001). В заключение следует отметить, что результаты этого пилотного исследования показали у пациентов с СРК-Д, получавших в течение 12 недель B. longum ES1, снижение уровня провоспалительных цитокинов и проницаемости кишечника, а также улучшение желудочно-кишечных симптомов, но необходимы дальнейшие исследования, включая группу плацебо-контроля, чтобы доказать причинно-следственную связь.
Синдром раздраженного кишечника (СРК) - это функциональное расстройство желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), поражающее примерно 15-25% населения, с более высокой распространенностью у женского пола [1]. Патофизиологические механизмы, лежащие в основе СРК, до конца не известны. В возникновении и продолжении заболевания могут участвовать различные факторы, в том числе генетика, кишечная микробиота и низкодифференцированное воспаление [2]. Кроме того, все большее признание получает роль кишечного барьера в патогенезе СРК [3]. Потеря барьерной целостности позволяет увеличить прохождение люминальных антигенов в слизистую оболочку кишечника, тем самым стимулируя иммунный ответ и сенсибилизируя афферентные нервные волокна [4].
Зонулин – это белок массой 47-kDa (47 кило-Дальтон), участвующий в регуляции плотных соединений (TJs), первичных детерминант парацеллюлярной проницаемости [5]. Сывороточный зонулин повышается при различных заболеваниях, при которых изменение проницаемости кишечника является центральным, включая целиакию (CD), воспалительные заболевания кишечника (ВЗК) и сахарный диабет 1 типа [6,7,8]. Кроме того, у пациентов с СРК наблюдался более высокий уровень зонулина в сыворотке крови по сравнению с контролем. Важно отметить, что уровень зонулина был напрямую коррелирован с тяжестью привычек кишечника (ритма дефекации) у пациентов с преобладающим синдромом раздраженного кишечника с диареей (СРК-Д) [9].
Во многих исследованиях сообщалось о наличии умеренной иммуновоспалительной активности как в толстом, так и в тонком кишечнике пациентов с СРК [10]. Соответственно, у пациентов с СРК наблюдалось повышение уровня провоспалительных цитокинов, включая интерлейкин IL-1β, фактор некроза опухоли-альфа (TNF-α), IL-6 и IL-8, а также снижение уровня противовоспалительных цитокинов, таких как IL-10 [11], IL-5 и IL-13 [10]. Через высвобождение воспалительных цитокинов, таких как TNF-α и интерферон-гамма (IFN-γ), Т-лимфоциты способствуют дисфункции плотных соединений (TJs) [12,13].
Новые литературные данные подтверждают патофизиологическую роль микробиома при СРК. Дисбактериоз, наблюдаемый у лиц с СРК, характеризуется снижением биологического разнообразия, увеличением количества бактероидов и клостридий, а также снижением количества бифидобактерий [14,15]. Имеются также данные о способности микробиома регулировать кишечный барьер. Изменение комменсальной микробиоты влечет за собой наличие морфологически аберрантной слизистой оболочки кишечника, характеризующейся более короткими ворсинками подвздошной кишки и более мелкими кишечными криптами, что было продемонстрировано у безмикробных мышей [16]. Исследования In vitro показали, что эубиотический микробиом благоприятствует процессу обновления клеток и экспрессии соединительных белков и муцинов [17]. Снижение концентрации бифидобактерий было связано с выраженностью болей в животе и количеством дефекаций. Таким образом, нацеливание на бифидобактерии в кишечном тракте может облегчить заболевания, связанные с микробиотой [18].
Обоснование применения бифидобактерии Bifidobacterium longum (B. longum) ES1 [19] у больных СРК-Д заключается в ее способности модулировать микробиом, улучшая дисбактериоз кишечника [20], оказывать противовоспалительную активность через понижающую регуляцию TNF-α и повышающую регуляцию IL-10 [21], а также восстанавливать целостность кишечного барьера, индуцируя синтез белков плотных соединений [22,23].
В нескольких мета-анализах сообщалось об эффективности и безопасности пробиотиков у пациентов с СРК, особенно для продуктов, содержащих бифидобактерии и лактобактерии. Однако между исследованиями существовала значительная неоднородность, что требовало осторожной интерпретации полученных результатов. Гетерогенность в основном касалась различий в подгрупповых анализах типа пробиотиков, комбинации и дозы, подтипа СРК, баллов симптоматической оценки и продолжительности лечения [24,25]. Наконец, было показано, что не только пробиотики, но и пребиотики, такие как инозитол и бета-глюкан, улучшают симптомы у пациентов с СРК и у пациентов с одновременным ВЗК и СРК [26,27].
Целью этого пилотного исследования было (1) оценить использование лечения B. longum ES1 в однородной группе пациентов с СРК-Д путем оценки клинического ответа, использования проверенных вопросников для СРК и серологического ответа, путем определение сывороточных уровней воспалительных цитокинов и зонулина, чтобы проанализировать потенциальное влияние на иммуномодуляцию и восстановление кишечного барьера, соответственно, и (2) оценить различия в ответе в зависимости от продолжительности лечения. Результаты этого пилотного исследования позволят нам определить оптимальную продолжительность пробиотической терапии и рассчитать необходимый размер выборки для проведения последующего рандомизированного двойного слепого плацебо-контролируемого клинического исследования.
Мы провели проспективное исследование в гастроэнтерологическом отделении больницы «A.O.U. Città della Salute e della Scienza di Torino», Италия, с апреля 2019 года по октябрь 2019 года.
Пациенты, пораженные СРК-Д, набирались и получали специфическую для штамма пробиотическую терапию в течение 8 или 12 недель. Пробиотическая терапия состояла из ежедневного введения 1 × 109 колониеобразующих единиц (КОЕ) B. longum ES1 вне приема пищи. Критериями включения были: возраст от 16 до 65 лет, диагноз СРК-Д по критериям Рим IV и Бристольской шкале стула [28], индекс массы тела (ИМТ) < 30 кг/м2, готовность подписать информированное согласие на участие в исследовании. Критериями исключения были: хирургия ЖКТ в анамнезе, диагностика ВЗК или целиакии, заболевания щитовидной железы, дивертикулярная болезнь, SIBO, колоректальный рак, другие клинически значимые заболевания, лечение препаратами, изменяющими функцию кишечника (например, опиатами, антихолинергическими и слабительными средствами), лечение антибиотиками (любая предыдущая антибактериальная терапия должна быть прекращена не менее чем за 4 недели до начала пробиотической терапии) и другими пре- / пробиотиками (другая пре- / пробиотическая терапия должна быть прекращена не менее чем за 2 недели до начала терапии), беременность / грудное вскармливание.
Все пациенты прошли базовый венозный отбор проб (Т0) и через 8 или 12 недель терапии (Т1); сыворотку собирали в полипропиленовые пробирки объемом 2 мл, маркированные идентификационным кодом участника исследования, и хранили при температуре -80 °С до проведения анализа.
Исследование проводилось в соответствии с принципами Хельсинкской декларации и было одобрено местным этическим комитетом (Comitato Etico Interaziendale A.O. Cittа della Salute e della Scienza di Torino - A.O. Ordine Mauriziano - A.S.L. Città di Torino) (код утверждения 0056924).
Определение сывороточного зонулина проводили методом конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА) (IDK® Zonulin ELISA Kit, Immunodiagnostik AG, Bensheim, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрации рассчитывались с использованием четырехпараметрического алгоритма, а результаты приводились в нг/мл, как сообщалось ранее [8]. Цитокиновую панель, включающую IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-23, IL-33, IFNy и TNFa, измеряли в образцах сыворотки крови методом мультиплексного иммуноанализа Bio-Plex® (Bio-rad Laboratories, Геркулес, Калифорния, США) на системе Luminex® 200 (Luminex Corporation, Остин, Техас, США). Для каждого цитокина были сформированы индивидуальные стандартные кривые, результаты которых приведены в пг/мл [32]. Персонал, проводивший лабораторные исследования, был слеп ко всем характеристикам пациентов, включенных в исследование.
В исследовании учитывались клинические и серологические результаты. Клинические результаты включали снижение балла по шкале тяжести симптомов СРК (IBS-SSS) на ≥50 баллов, уменьшение по меньшей мере на 30% боли в животе [33] и вздутия живота по визуальной аналоговой шкале (VAS), нормализацию формы стула по Бристольской шкале стула и увеличение общего балла IBS-QoL на ≥14 баллов [34,35]. Серологические результаты включали изменение уровня воспалительных цитокинов и зонулина в течение периода наблюдения для оценки потенциального изменения иммуновоспалительной активности и проницаемости кишечника соответственно. Как клинические, так и серологические результаты оценивались в общей популяции исследования и в зависимости от продолжительности лечения.
Непрерывные переменные выражались как медиана и 95% доверительный интервал (ДИ) или как среднее ± стандартное отклонение (SD). Нормальность распределения данных проверялась с помощью теста Д'Агостино. Сравнение количественных переменных проводилось с помощью t-критерия Стьюдента; для сравнения значений при T0 и при T1 использовался t-критерий Стьюдента для парных измерений. Сравнение качественных переменных проводилось с помощью точного критерия Фишера или критерия хи-квадрат для определения тренда, где это уместно. Непараметрические переменные анализировались с помощью критерия Уилкоксона для парных выборок и критерия Манна-Уитни для независимых выборок. Корреляция между количественными переменными проводилась с помощью непараметрического критерия Спирмена. Результаты всех анализов были признаны значимыми при значениях Р < 0,05. Все статистические анализы проводились с использованием программного обеспечения MedCalc версии 18.9.1 (MedCalc Software bvba, Остенде, Бельгия; http://www.medcalc.org; 2018).
В исследование были включены шестнадцать пациентов в возрасте от 16 до 59 лет. Основнные характеристики включенной когорты представлены в Таблице 1. Большинство пациентов были женщинами (n = 10/16, 38%). Пациенты в основном имели нормальный вес (ИМТ < 25 кг/м2) и все они потребляли средиземноморскую диету [36]. Никаких диетических изменений до начала исследования сделано не было. По шкале FBDSI тяжесть СРК была легкой у 1 пациента (6%), умеренной - у 8 пациентов (50%) и тяжелой - у 7 пациентов (44%). Анамнестический сбор показал, что у 4 из 16 включенных пациентов (25%) была непереносимость лактозы, подтвержденная водородным дыхательным тестом (HBT). Все пострадавшие пациенты сообщили о незначительном или полном отсутствии пользы после исключения лактозы из рациона питания в предыдущие годы, и никаких изменений в рационе питания не проводилось в течение периода исследования.
Таблица 1. Исходные характеристики включенных пациентов.
Характеристики
|
n (%)
|
Пациенты, n
|
16
|
Женский пол, n (%)
|
10 (62)
|
Возраст (средн. лет ± SD)
|
37.6 ± 15.6
|
ИМТ (средн. кг / м2 ± SD)
|
21.3 ± 3.4
|
В браке / в отношениях, n (%)
|
4 (25)
|
Кесарево сечение, n (%)
|
5 (31)
|
История грудного вскармливания, n (%)
|
7 (44)
|
Текущие курильщики, n (%)
|
0, (0)
|
Непереносимость лактозы, n (%)
|
4 (25)
|
Атопия, n (%)
|
5 (31)
|
FBDSI (среднее значение ± SD)
|
101 ± 52
|
IBS-SSS (среднее значение ± SD)
|
289 ± 91
|
Боль в животе (среднее ± SD)
|
57 ± 28
|
Общий балл IBS-QoL (среднее значение ± SD)
|
71 ± 16
|
Бристольская шкала стула (среднее ± SD)
|
6 ± 1
|
Зонулин (нг / мл, среднее значение ± SD)
|
42.5 ± 9.3
|
IL-6 (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
4.22, 2.87–7.06
|
IL-8 (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
3.47, 1.96–5.32
|
IL-12p70 (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
1.77, 0.57–2.16
|
TNF-α (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
5.69, 2.23–11.09
|
Сокращения: индекс массы тела (ИМТ), доверительный интервал (ДИ), индекс тяжести функционального расстройства кишечника (FBDSI), интерлейкин (IL), качество жизни при синдроме раздраженного кишечника (IBS-QoL), система оценки тяжести синдрома раздраженного кишечника (IBS-SSS), n (число), стандартное отклонение (SD), фактор некроза опухоли-альфа (TNF-α).
Как и ожидалось, мы наблюдали положительную корреляцию между FBDSI и IBS-SSS (rs = 0.658, 95% ДИ 0.241–0.870, p = 0.006) и обратную корреляцию между IBS-SSS и общим баллом IBS-QoL (rs = −0.550, 95% ДИ −0.822–−0.074, p = 0.027). Возраст положительно коррелировал с уровнями сывороточного зонулина (rs = 0.558, 95% ДИ 0.086–0.825, p = 0.025) и отрицательно коррелировал с FBDSI (rs = −0.570, 95% ДИ −0.831–−0.104, p = 0.021). Существенная положительная корреляция также наблюдалась между интенсивностью боли в животе и уровнем TNF-α (rs = 0.585, 95% ДИ 0.126–0.838, p = 0.017). Только небольшая положительная тенденция наблюдалась в отношении корреляции между сывороточным зонулином и ИМТ (rs = 0.459, 95% ДИ −0.047–0.778, p = 0.074), между значениями сывороточного зонулина и IL-6 (rs = 0.453, 95% ДИ −0.055–0.775, p = 0.078) и между значениями IL-8 и TNFα (rs = 0.439, 95% ДИ −0.072–0.768, p = 0.089). Никаких других значимых корреляций между уровнями зонулина или цитокинов в сыворотке крови и другими демографическими и клиническими характеристиками исследуемой популяции не наблюдалось (рис. 1).
Рисунок 1. Корреляция между возрастом и уровнем сывороточного зонулина (A), возрастом и FBDSI (B), интенсивностью боли в животе и значениями TNF-α (C), уровнями сывороточного зонулина и ИМТ (D), значениями сывороточного зонулина и IL-6 (E) и значения IL-8 и TNF-α (F). Сокращения: Индекс массы тела (ИМТ), Индекс тяжести функционального расстройства кишечника (FBDSI), интерлейкин (IL), фактор некроза опухоли-альфа (TNF-α).
В начале исследования между пациентами, проходящими лечение в течение 8 недель и 12 недель, не было выявлено существенных различий в отношении тяжести заболевания, уровней сывороточного зонулина и значений цитокинов (таблица 2).
Таблица 2. Сравнение тяжести заболевания, общего балла IBS-QoL, Бристольской диаграммы стула, уровня сывороточного зонулина и цитокинов, оцененных на исходном уровне (T0), между двумя группами пациентов, получавших B. Longum ES1 в течение 8 или 12 недель.
Параметры
|
T0 (8 нед.)
|
T0 (12 нед.)
|
p
значение
|
Пациенты (n)
|
8
|
8
|
|
Тяжесть болезни
(легкая / средняя / тяжелая)
|
1/2/5
|
0/6/2
|
0.248
|
Общий балл IBS-QoL
(среднее значение ± SD)
|
65 ± 17
|
78 ± 13
|
0.118
|
Бристольская шкала стула
(среднее значение ± SD)
|
6 ± 1
|
7 ± 1
|
0.150
|
Зонулин
(нг / мл, среднее значение ± SD)
|
41.1 ± 11.60
|
43.8 ± 6.8
|
0.570
|
IL-6 (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
3.26, 2.58–5.01
|
6.77, 3.50–10.09
|
0.060
|
IL-8 (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
3.46, 1.55–5.77
|
3.78, 1.55–5.99
|
0.670
|
IL-12p70 (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
1.37, 0.57–3.68
|
1.77, 0.57–2.16
|
0.830
|
TNF-α (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
5.69, 0.47–10.70
|
7.99, 0.38–15.06
|
0.460
|
Сокращения: интерлейкин (IL), доверительный интервал (ДИ), число (n), качество жизни при синдроме раздраженного кишечника (IBS-QoL), стандартное отклонение (SD), фактор некроза опухоли-альфа (TNF-α), неделя (нед.).
Изменения клинических параметров, уровней сывороточного зонулина и цитокинов от исходного уровня до конца терапии в общей популяции пациентов с СРК-Д, получавших B. longum ES1, представлены в таблице 3.
Таблица 3. Изменение показателей опросников (анкет), уровня сывороточного зонулина и цитокинов от Т0 до Т1 в общей популяции исследования.
Параметры
|
T0
|
T1
|
p
значение
|
Пациенты (n)
|
16
|
16
|
|
IBS-SSS (среднее значение ± SD)
|
289 ± 91
|
263 ± 118
|
0.103
|
Интенсивность боли (среднее ± SD)
|
57 ± 28
|
47 ± 31
|
0.216
|
Вздутие живота (среднее ± SD)
|
39 ± 30
|
44 ± 32
|
0.340
|
Общий балл IBS-QoL (среднее значение ± SD)
|
71 ± 16
|
73 ± 17
|
0.299
|
Бристольская шкала стула (среднее значение ± SD)
|
6 ± 1
|
4 ± 1
|
<0.001 *
|
Зонулин
(нг / мл, среднее значение ± SD)
|
42.5 ± 9.3
|
40.5 ± 6.8
|
0.179
|
IL-6 (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
4.22, 2.87–7.06
|
0.01, 0.01–3.65
|
<0.001 *
|
IL-8 (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
3.47, 1.96–5.32
|
0.01, 0.01–1.12
|
0.011 *
|
IL-12p70 (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
1.77, 0.57–2.16
|
0.01, 0.01–0.21
|
0.001 *
|
TNF-α (пг / мл, медиана, 95% ДИ)
|
5.69, 2.23–11.09
|
0.01, 0.01–5.69
|
0.034 *
|
Сокращения: доверительный интервал (ДИ), интерлейкин (IL), качество жизни при синдроме раздраженного кишечника (IBS-QoL), система оценки тяжести синдрома раздраженного кишечника (IBS-SSS), число (n), стандартное отклонение (SD), фактор некроза опухоли-альфа (TNF-α), статистически значимый (*).
Клинический ответ на пробиотическую терапию с точки зрения снижения оценки IBS-SSS ≥50 баллов наблюдался у 5/16 пациентов (31%), из которых 4/8 (50%) получали лечение в течение 12 недель и 1/8 (13%) получали лечение в течение 8 недель (р = 0,282); действительно, тенденция к снижению оценки IBS-SSS с T0 до T1 была обнаружена только у пациентов, получавших лечение в течение 12 недель (236 ± 67 против 189 ± 80, p = 0,072). Улучшение ≥30% интенсивности болей в животе было обнаружено у 5/16 (31%) пациентов, все они получали лечение в течение 12 недель (5/8; 63%); последовательно, пациенты, получавшие лечение в течение 12 недель, показали значительное снижение интенсивности боли в животе по сравнению с пациентами, получавшими лечение в течение 8 недель (с 63 ± 28 до 34 ± 28, р = 0,020 и с 52 ± 30 до 62 ± 24, р = 0,132 соответственно). И наоборот, не было отмечено значительного улучшения вздутия живота (р = 0,340), независимо от продолжительности терапии. Общее увеличение показателя IBS-QoL ≥14 баллов было получено только у 1/16 (6%), которых лечили в течение 12 недель. Консистенция стула улучшается независимо от продолжительности терапии (р <0,001). У девяти из 16 (56%) пациентов нормализовалась консистенция стула (тип 3 или 4 по шкале Бристоля): 5/8 (63%) лечились в течение 12 недель, тогда как 4/8 (50%) лечились в течение 8 недель (р = 0,626). Ни один из пациентов не сообщил о побочных эффектах во время или после лечения.
Наконец, мы наблюдали значительное снижение значений IL-6, IL-8, IL-12 и TNFα от исходного уровня до конца терапии независимо от продолжительности лечения. И наоборот, не было обнаружено существенного снижения уровня сывороточного зонулина в общей популяции исследования; однако у пациентов, получавших лечение в течение 12 недель, уровень сывороточного зонулина значительно снизился с 43,8 ± 6,8 нг / мл при T0 до 40,8 ± 5,0 нг / мл при T1 (p = 0,036) (рис. 2).
Рисунок 2. Изменение уровней сывороточного зонулина от исходного уровня (T0) до конца терапии (T1) у пациентов с СРК-Д, получавших B. longum ES1 в течение 8 недель или 12 недель.
В этом пилотном исследовании мы обнаружили улучшение общих симптомов СРК и улучшение иммуно-воспалительного состояния и целостности кишечного барьера. Эти аспекты были особенно значительными у пациентов, которых лечили B. longum ES1 в течение 12 недель по сравнению с 8 неделями.
Накопленные данные свидетельствуют о том, что комменсальные бактерии могут играть определенную роль в развитии СРК и что специфическая пробиотическая терапия способна улучшить симптомы ЖКТ у таких пациентов [37]. Действительно, недавний систематический обзор показал, что пациенты с СРК имели более низкое микробное α-разнообразие как в образцах стула, так и в образцах слизистой оболочки кишечника, причем общий микробный профиль характеризовался повышенным уровнем Firmicutes и сниженным уровнем Bacteroidetes по сравнению со здоровыми субъектами [38]. С другой стороны, существует недостаточная согласованность между «отпечатками пальцев» кишечной микробиоты, сообщенными в различных исследованиях, вероятно, из-за различных конструкций исследований, различных методов, используемых для бактериального профилирования (включая хранение образцов, извлечение ДНК и секвенирование) и различных статистических подходов [39]. У 48% пациентов с СРК-Д было показано, что пробиотическая терапия обеспечивала адекватное купирование общих симптомов СРК, улучшение консистенции стула и тенденцию к улучшению качества жизни [40]. Совсем недавно Giannetti et al. сообщалось, что введение пробиотической смеси Bifidobacterium infantis M-63, breve M-16V и longum BB536 у пациентов с СРК снижало частоту абдоминальных болей и улучшало QoL у значительно большей доли пациентов, по сравнению с плацебо [41]. Более того, Pinto-Sanchez et al. показано, что пробиотическая терапия (B. longum NCC3001) улучшает сопутствующую психиатрическую патологию и повышает качество жизни пациентов с СРК [42]. Последовательно мы наблюдали улучшение симптомов СРК, особенно после 12 недель терапии B. longum ES1. Однако по сравнению с предыдущими исследованиями мы не наблюдали значительного улучшения качества жизни нашей популяции. Вероятно, еще предстоит определить пробиотическую смесь или конкретный штамм, полезный для каждого пациента.
Исследования на людях и животных подтверждают концепцию о том, что низкодифференцированное воспаление может нарушать рефлексы желудочно-кишечного тракта и активировать висцеральную сенсорную систему, способствуя изменению физиологии желудочно-кишечного тракта и гиперчувствительности, лежащих в основе СРК [43,44]. Более того, недавнее исследование на мышиной модели продемонстрировало важную роль нейрон-глиальной коммуникации, опосредованной TNF-α и глиальной активацией, в висцеральной воспалительной гиперчувствительности [45]. Последовательно мы обнаружили значительную положительную корреляцию между интенсивностью абдоминальной боли и уровнем TNF-α. В нескольких исследованиях сообщалось о дисбалансе провоспалительных цитокинов, таких как IL-6, IL-8 и TNF-α, у пациентов с СРК по сравнению с контролем [46,47,48,49]. К сожалению, в настоящем исследовании мы не смогли обосновать эти данные из-за отсутствия здоровой контрольной популяции. Наконец, мы обнаружили положительную корреляцию между IL-8 и TNF-α в соответствии с хемотаксической и активационной функцией, выполняемой IL-8 в отношении нейтрофилов, которые, в свою очередь, продуцируют TNF-a. Лечение препаратом В. longum ES1 приводил к значительному снижению уровня цитокинов от исходного уровня до конца терапии, способствуя клиническому улучшению, наблюдаемому в нашей популяции. Вместе взятые, эти результаты подтверждают как низкодифференцированное воспаление, описанное у пациентов с СРК [36], так и противовоспалительный эффект B. longum ES1 и в целом поддерживают пробиотическую терапию как приемлемый вариант лечения у пациентов с СРК.
Наконец, в запутанной головоломке патофизиологии СРК было показано, что изменение проницаемости кишечника играет существенную роль, особенно в его варианте с преобладанием диареи. Действительно, несколько исследований случай-контроль показали, что проницаемость кишечника, измеренная с помощью теста мультисахаридной абсорбции, увеличилась у пациентов с СРК-Д по сравнению со здоровым контролем [50,51]. Более того, Linsalata et al. идентифицированы два различных подтипа СРК-Д, которые демонстрируют Различный воспалительный статус в зависимости от функции проницаемости кишечника, что еще больше подтверждает концепцию о том, что нарушенный барьер ЖКТ может способствовать более легкому прохождению люминальных антигенов, которые, в свою очередь, могут вызывать воспалительную реакцию, влияющую на течение заболевания [52]. В подтверждение этого мы обнаружили положительную корреляцию между сывороточным зонулином, маркером кишечной проницаемости, и IL-6, секретируемым макрофагами в результате связывания патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (PAMPs) с толл-подобными рецепторами (TLRs). Кроме того, мы наблюдали положительную корреляцию между возрастом и уровнем зонулина. Вероятным объяснением этих выводов может быть длительный период воздействия PAMPs. Совсем недавно было сообщено, что лечение B. longum BB536 и Lactobacillus rhamnosus HN001 c витамином В6, по сравнению с плацебо, значительно улучшило симптомы ЖКТ и восстановило проницаемость кишечника (целостность кишечного барьера) у пациентов с СРК, о чем свидетельствует улучшенный процент восстановления сукралозы [53]. На сегодняшний день очень немногие исследования изучали вопрос концентрации зонулина в сыворотке крови у пациентов с СРК. Singh et al. показано, что уровень сывороточного зонулина у больных СРК был выше по сравнению со здоровыми контрольными группами и сопоставим с таковыми при активной целиакии [9]. Принимая во внимание результаты по концентрации зонулина в сыворотке крови из предыдущих исследований, проведенных в нашем центре на пациентах с ВЗК, мы обнаружили, что концентрация зонулина в сыворотке крови у пациентов с СРК-Д была сопоставима с таковой у пациентов с ВЗК (43,3 (95% ДИ 37,3–46,4) против 45,3 (95% ДИ 43,5–47,8) нг/мл соответственно) [30] и выше, чем у здоровых контрольных групп (8,6 (95% ДИ 7,2–10,5) нг/мл) [8]. В настоящем исследовании значительное снижение концентрации зонулина в сыворотке крови наблюдалось у пациентов, получавших пробиотическую терапию в течение 12 недель, а не у тех, кто получал лечение в течение 8 недель. Эти данные свидетельствуют о наличии измененной кишечной проницаемости у пациентов с СРК-Д, и мы наблюдали улучшение целостности барьера у пациентов, получавших лечение в течение 12 недель.
Основными ограничениями текущего исследования являются ограниченный размер выборки и отсутствие контрольной группы, получавшей плацебо, чтобы сделать окончательные выводы о реальной эффективности лечения B. longum ES1 в нашей популяции. Мы наблюдали значительное улучшение воспалительного статуса и консистенции стула независимо от продолжительности лечения. Ни один из клинических результатов не позволяет сделать какие-либо выводы о влиянии на естественный анамнез СРК с учетом продолжительности терапии, характера симптомов СРК (нарастание и уменьшение) и незначительных различий. Поскольку это было экспериментальное исследование, его цель состояла в том, чтобы оценить, может ли наша гипотеза быть достаточно обоснованной, чтобы оправдать подробное исследование. Такие данные являются многообещающими и создают основу для контролируемых клинических испытаний с более широкими тематическими исследованиями.
В заключение следует отметить, что наши предварительные результаты показали снижение уровня провоспалительных цитокинов в общей когорте исследования и, скорее всего, улучшение проницаемости кишечника (целостности кишечного барьера) и желудочно-кишечных симптомов в подгруппе пациентов с СРК-Д. Дальнейшие рандомизированные, двойные слепые, плацебо-контролируемые исследования имеют фундаментальное значение для подтверждения результатов этого пилотного исследования на более крупных группах пациентов с СРК-Д.
См. дополнительно:
Литература
Комментариев пока нет