ООО "ПРОПИОНИКС"
пн-пт с 09:00 до 18:00 | +7 (966) 348-80-35 |
Одним из актуальных направлений современной микробиологии является изучение адгезивного процесса различных микроорганизмов. Известно, что способность микроорганизмов приживаться в ЖКТ, создавая защитный барьер, обусловлена их адгезивными свойствами. Адгезия - это межклеточное взаимодействие, выражающееся в прочном прикреплении клеток к субстрату. Следует отметить, что от адгезивных свойств во многом зависят стабильность и защитные свойства микрофлоры макроорганизма.
Адгезия к слизи, гликопротеинам и эпителиальным клеткам, а также колонизация в желудочно-кишечном тракте человека является основополагающими характеристиками микроорганизмов, обладающих пробиотическими свойствами.
Злаковые культуры и жмых ядра кедрового ореха содержат высокое количество растворимых и нерастворимых пищевых волокон и могут адсорбировать и колонизировать бифидобактерии в процессе культивирования. В связи с этим в дальнейших исследованиях изучали адгезивные свойства бифидобактерий при их культивировании на питательной среде с внесением пребиотиков. Адгезию бифидобактерий оценивали по среднему показателю адгезии (СПА), коэффициенту участия эритроцитов (КУЭ), индексу адгезивности микроорганизмов (ИАМ). Микроорганизмы считаются высокоадгезивными - при ИАМ более 4,0; среднеадгезивными – при ИАМ от 2,51 - 4,0; малоадгезивными – при ИАМ от 1,76 – 2,54. Результаты исследований представлены в таблице 1.
Таблица 8 - Влияние пребиотиков на адгезивные свойства бифидобактерий В. longum ДК-100 и B. bifidum 83
Наименование штамма
микроорганизмов
|
СПА
|
КУЭ, %
|
ИАМ
|
Адгезивность
|
В. longum ДК-100
1. Контроль
2. Овсяная мука 1,0 %
3. Ячменная мука 1,5 %
4. Жмых ядра кедрового ореха 2,0 %
|
4,2
4,3
4,5
4,4
|
84
83
85
86
|
4,76
5,18
5,29
5,11
|
Высокоадгезивный
|
B. bifidum 83
1. Контроль
2. Овсяная мука 1,0 %
3. Ячменная мука 1,5 %
4. Жмых ядра кедрового ореха 2,0 %
|
3,6
4,3
4,4
4,6
|
82
85
85
88
|
4,12
5,05
5,17
5,22
|
Результаты исследований, представленные в таблице 8, свидетельствуют о том, что исследуемые штаммы бифидобактерий в присутствии пребиотиков обладают более высокими адгезивными свойствами.
Необходимо отметить, что бактериальная поверхность заряжена отрицательно, у грамположительных бактерий это обусловлено присутствием тейхоевых кислот. В результате физико-химических взаимодействий, как электростатических, так и прочих, микробная клетка притягивается к поверхности (субстрату), и таким образом возникает начальный контакт. «Субстрат» покрыт слоем высокомолекулярных полисахаридов, пребиотиков. Сближение микробной клетки с субстратом вызывает изменение ее формы и перераспределение заряженных и незаряженных групп на контактирующей клеточной поверхности. В результате чего зона контакта увеличивается, что способствует взаимодействию с субстратом. Обычно в процессе прикрепления к поверхности синтезируются адгезины, о чем свидетельствует полученные нами результаты (табл. 8).
Прикрепление также может быть инициировано гидрофобными взаимодействиями. Поскольку все молекулы, и полярные и неполярные, в результате физико-химического взаимодействия накапливаются у границы с поверхностью, прикрепленные бактерии лучше снабжаются необходимыми веществами, чем свободные клетки в жидкой среде. На прикрепленные бактерии в меньшей степени воздействуют токсичные соединения, в том числе кислород, так как они диффундируют только с одной стороны и нейтрализуются всем микробным сообществом, а не одиночными клетками. Это явление особенно важно для анаэробных микроорганизмов, к которым относятся бифидобактерии.
Прикрепленные бактерии гораздо легче, чем свободноплавающие бактерии, образуют кооперативные структуры друг с другом или с другими бактериями. В прикрепленных бактериальных сообществах имеются также большие возможности для обмена плазмидами.
Вероятно, высокомолекулярные полисахариды, содержащиеся в исследуемых растительных добавках и синтез адгезинов способствуют прикреплению бифидобактерий к пищевым волокнам.
К механизмам, гарантирующим стабильность микробного консорциума, кроме адгезии относится также когезия (агрегация клеток). В литературных источниках недостаточно сведений о межклеточных контактах микроорганизмов, отражающих закономерности развития микробных популяций как саморегулирующих многоклеточных систем.
Известно, что популяции бифидобактерий демонстрируют высокоорганизованное, мицелиоподобное развитие на искусственных питательных среда. Топография взаиморасположения палочковидных, коккоидных и мультисиптированных форм бифидобактерий в мицелии определяется вектором репродуктивных потенций, а также обособлением клеток в процессе формирования перегородок и разделения дочерних особей. В литературе имеются единичные сведения, освещающие агрегацию клеток бифидобактерий и образованию в дальнейшем сложных многоклеточных систем.
Следующий этап исследований посвящен изучению влияния пребиотиков на когезию бифидобактерий. Результаты исследований представлены на рисунках 4-5.
а) контроль
|
б) жмыха ядра кедрового ореха 2%
|
в) овсяная мука 1%
|
г) ячменная мука 1,5%
|
Рисунок 4 – Микрокартина бифидобактерий В. longum ДК-100
(увеличение 1х1000)
а) контроль
|
б) жмыха ядра кедрового ореха 2%
|
в) овсяная мука 1%
|
г) ячменная мука 1,5%
|
Рисунок 5 – Микрокартина бифидобактерий B. bifidum 83
(увеличение 1х1000)
Из представленных выше рисунков 4 (б-г), 5 (б-г) видно, что внесение пищевых волокон приводит к агрегации клеток бифидобактерий и формированию микроколоний. Согласно современным данным, механизм позитивного эффекта пищевых волокон, растворимых β-глюканов овса и ячменя и нерастворимых высокомолекулярных полисахаридов, заключается в создании дополнительной площади для фиксации бифидобактерий и биотрансформации пищевых волокон с образованием доступных источников углерода и энергии. Из литературных данных известно, что адсорбция и иммобилизация на биоволокнах защищают клетки бифидобактерий при стрессовых воздействиях.
Если некоторые авторы, решающее значение в объединении бактериальных клеток отводят гликокаликсу, то другие склонны рассматривать поверхностные слизеподобные слои, их окружающие, как адсорбируемый ими из культуральной жидкости материал.
По-нашему мнению экзогенные слизи пребиотиков, содержащиеся в культуральной жидкости, способствуют процессу когезии бифидобактерий.
Полученные нами результаты подтверждаются данными литературы, согласно которым микроорганизмы рода Bifidum способны осуществлять гидролиз декстрана по α-1-6-глюкозидным связям с синтезом высших изомальтодекстринов, а также утилизировать целлобиозы и целлюлозы.
Как свидетельствуют данные рисунков 4б и 5б, культивирование бифидобактерий в питательной среде с внесением жмыха ядра кедрового ореха, где содержится высокое количество нерастворимых пищевых волокон, приводит к интенсификации межклеточных связей и формированию обширных микроколоний. Эффект образования многоклеточных систем обеспечивает адаптационную, физиологическую устойчивость клеток к конкретной экологической нише, что, возможно, является реакцией на воздействие отрицательных экзо− и эндогенных факторов.
В результате проведенных исследований установлено, что исследуемые штаммы бифидобактерий обладают высокими адгезивными свойствами, колонизируются на поверхности пищевых волокон злаковых культур и жмыха ядра кедрового ореха с образованием агрегатов, что повышает их устойчивость к неблагоприятным факторам среды.
Полученные данные подтверждают целесообразность применения высококогезивных и высокоадгезивных штаммов бифидобактерий при производстве препаратов различного назначения – в медицине, ветеринарии, сельском хозяйстве, биотехнологии.